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C-33 A人子宫颈癌
名称 C-33 A人子宫颈癌
型号
报价
特点 C-33 A人子宫颈癌公司集研发、销售、实验室技术服务于一体,并以多家欧美研究平台先进的技术实力为依托,向中国市场提供国际品质国内价格的超值服务,专业提供实验所需的各类细胞株,因子,抗体等多种生物试剂。公司细胞主要来源ATCC,ECACC,ScienCell,ACC, Invitrogen 等,以及少数国内外大学}
  • 详细内容

细胞名称:

C-33 A人子宫颈癌
  • 公司建立有标准化GMP细胞培养车间,依托引进ATCCDSMZECACCRIKEN、中科院、协和医院引进保藏细胞种类近四千株,从来源,引进,培养,冻存,复苏,运输,注重每一个环节,提供活力强,代数靠前,优质细胞株细胞系。

 

 

二、C-33 A人子宫颈癌

 

传代操作:

1.吸除培养瓶内旧培养液。

2.加入无菌pbs洗液(5-8mL)轻轻润湿细胞,稀释多余的培养基,之后吸走洗液,动作要轻,不可吹打到细胞。

3.向瓶内加入含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少许,以能覆满瓶底为限。

4.置温箱中2~5分钟,一旦镜检发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,细胞变圆,比较松动后,立即终止消化。

5.加入该细胞对应的培养基6mL(T25培养瓶)或12mL(T75培养瓶)终止消化。

6.用吸管通过吸取的培养基轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时应尽量以zui少的次数将细胞从壁上吹下,不仅要控制吹打的力度、次数,还要注意要将细胞尽可能吹成单个。这样既能减少死细胞,又能便于细胞再次均匀贴壁生长。

7.依据传代比例,将细胞悬液分瓶,再补充培养基后,静置于温箱培养,直止贴壁。

 

贴壁细胞在培养瓶长成致密单层后,继续生长的空间不足,培养基中的营养成份也消耗较多,同时代谢废物也有较多堆积,需要分瓶培养,对细胞进行传代扩增。对于贴壁不太紧的细胞如293,可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶。以笔者的经验,以轻吹或加培养液后轻摇可下较好,但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。

 

胰酶消化的程度是一个关键:消化过度则对细胞的活性影响较大,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性。影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、解冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。含有EDTA的胰酶会比不含的消化能力强很多,不同细胞对消化液的敏感性也不同,比如HEP-G2人肝癌细胞,该细胞消化时间可长达10分钟左右。 消化时间仔细去摸索一下,每过2分钟镜下观察细胞是否变圆,记录zui佳消化时间,下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。

 

对于悬浮细胞换液时只需要补液就行。

悬浮细胞的传代则不需要用胰酶消化,直接通过计数算好传代的比例,直接分瓶,补液。有些悬浮细胞趋于成团生长,此时细胞生长状态良好,当补液时,避免吹打。典型实例:jurkat就是成团生长。当jurkat细胞密度比较大时,可将培养瓶竖直放置2分钟左右,待大部分细胞沉下,吸走上层清液,补充等量的新鲜培养基。

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