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上海细胞库,COC1/DDP,人卵巢癌顺铂耐药株
名称 上海细胞库,COC1/DDP,人卵巢癌顺铂耐药株
型号 COC1/DDP
报价
特点 上海细胞库,COC1/DDP,人卵巢癌顺铂耐药株
HAKATA和HyClone:液体培养基、PBS、胰酶、胶原酶、双抗;trizol试剂、Sigma试剂 DMSO D2650、B27、无血清冻存液H-W-100、HAKATA 干粉培养基、西班牙琼脂糖等。}
  • 详细内容

上海细胞库,COC1/DDP,人卵巢癌顺铂耐药株  

优势批发进口胎牛血清、人AB血清、新生牛血清、无外泌体血清:德国SERANA S-FBS-EU-015;HAKATA 10099-141、 12676-029 16140-071、16000-044、10437-028、10270-106BOVOGEN胎牛血清;PAN P30-3302、ST30-2602HyClone SH30084.03、SH30068.03、 SH30070.03、 SV30087.03NTC胎牛血清SFBE; BI 04-001-1ACS、04-002-1A; SIGMA人AB血清H4522、FBS F2442;GEMINI 900-108、100-500、人AB血清100-512;康宁血清 35-076-CV;SBI无外泌体血清等优质血清。HAKATA和HyClone:液体培养基、PBS、胰酶胶原酶双抗trizol试剂、Sigma试剂 DMSO D2650、B27、无血清冻存液H-W-100、HAKATA 干粉培养基、西班牙琼脂糖等。Santa抗体、Abcam抗体等,ATCC原代菌株和细胞代购,更多的人源、鼠源等传代细胞(STR鉴定)销售,售后完善!欢迎小窗咨询订购。

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上海细胞库,COC1/DDP,人卵巢癌顺铂耐药株

养细胞是一件戳心戳肺的事情,你要像照顾小孩一样仔细对待,爱护她,呵护她。

细胞培养前的准备

在您带上手套开始细胞培养之前,先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足,以免在开始实验后再次出入操作台,这样可以降低细胞污染的风险。

细胞培养基也应先预热,选择只预热部分培养基而非整瓶加热,不但可以节约实验时间,而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。

结束操作后,别忘了培养基对光敏感,应尽可能避光保存。

细胞培养的定期检查,定期检查培养细胞的形态,即形状和外观,对于细胞培养实验取得成功至关重要。

除确认细胞的健康状态外,每次操作细胞时通过肉眼和显微镜检查细胞还可早期发现污染征象,避免污染扩散至实验室其他细胞。

细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。

这些变质征象可能为多种原因所致,例如:培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质,或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。

ATCC原代细胞和菌株代理

一、传代培养(消化法)

1、预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2、用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手,严格进行无菌操作前的准备工作。

3、正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。

4、点燃酒精灯:注意火焰适宜。

5、取出预热好的培养用液:取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

6、从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。

7、打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。

注意事项:严格的无菌操作过程

二、胰蛋白酶消化

1、加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液)注意消化液的量以盖住细胞zui好,zui佳消化温度是37℃。

2、显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。

3、吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。

注意事项:

适度消化:消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。

三、吹打分散细胞

1、吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2、吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3、平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。

4、弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四、分装稀释细胞

1、分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。

2、显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×10^5/ml。zui后要做好标记。

五、继续培养

用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++

细胞复苏-ATCC原代细胞和菌株代理,ATCC代理

一、准备工作

1、将水浴锅预热至37℃

2、用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

二、取出冻存管

1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

2、从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。

三、迅速解冻

1、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。

2、约1-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。

四、制备细胞重悬液

1、离心(3000rpm,3min)后吸弃上清液。

2、向离心管内加入10ml培养液,吹打制成细胞悬液。

五、细胞计数

细胞浓度以5×105/ml为宜。

六、细胞培养

将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养,换液的时间由细胞情况而定。

细胞计数-ATCC原代细胞和菌株代理,ATCC代理

 当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

一、准备工作

取一瓶传代的细胞,按照《传代细胞培养(消化法)》中的传代方法繁殖细胞,待长成单层后以被使用。

二、细胞悬液制备细胞悬液制备

细胞悬液的制备方法是用0.25%的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后,加入培养液(或Hanks液或PBS等平衡盐溶液),吹打制成待测细胞悬液。

三、细胞计数

1、盖好盖玻片:取一套血球计数板,将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。

2、制备计数用的细胞悬液:用吸管吸5滴细胞悬液到一离心管中,加入5滴台盼蓝染液(0.4%)或苯胺黑,活细胞不会被染色,加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。

3、将细胞悬液滴入计数板:将待测细胞悬液吹均匀,然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入,要保证盖片下充满悬液,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。

4、统计四个大格的细胞数:将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察,并移动计数板,当看到镜中出现计数方格后,数出四角的四个大铬(每个大格含有16个中铬)中没有被染液染上色的细胞数目。

5、计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度:

(细胞悬液的细胞数)/ml= ( 四个大格子细胞数/4) ×2×104

说明:公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以2因为细胞悬液于染液是1:1稀释。

公式中乘以10^4因为计数板中每一个大格的体积为:

1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm而 1ml=1000mm3

四、细胞计数要点

1、进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于104个/ml,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中;

2、要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。

3、取样计数前,应充分混匀细胞悬液,尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀,以求计数准确;

4、数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计右线,不计左线。

5、操作时,注意盖片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。

只要满足以下两个条件就可以进行细胞活力检测正常细胞的细胞膜是完整的。

Propidium iodide(PI碘化丙啶)是一种核酸染料,常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测和流式细胞仪分析。PI不能通过正常完整的细胞膜,故细胞在处于坏死或晚期凋亡时细胞膜被破坏,这时可为PI着红色,可以用来分辨坏死细胞/正常细胞。

加入另一种可以透过细胞膜的核酸染料,就可以通过两种染料将活细胞和死细胞区分开。

PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。

 

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