血清的常用问题及处理方法‖传秋生物16010-159

1、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？

 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。

大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

4、如何避免血清中产生沉淀？

按如下操作可避免沉淀的产生：

（1）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

 （2）血清分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。

（3）勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

（4）勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。

（5）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

（6）若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

5、培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些

抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

6、为什么要热灭活血清?

 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。

在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

7、有必要做热灭活吗?

 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认

为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确

保血清的质量!

 8、细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，

首先，

要肉眼观察培养基是否混浊，

然后，

在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁

殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观

察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与

以下几种情况有关：

（1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；

（2）血清质量不好，反复冻融的结果；

（3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；

（4）配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；

（5）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

9、细胞培养中如何防止黑点生成？

 （1）尽可能地减少血清冻融次数。

（2）培养基无需37℃水浴。

（3）培养基保持*PH值7.0- 7.2。

（4）严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

（5） 掌握细胞传代的*时机，细胞切勿生长过老。

 使用前处理：大部分血清在使用前必须灭活处理，即56℃30分钟。灭活的目的是去除血清中的补体成分，避免补体对细胞产生毒性作用。血清经过灭活也会损失一些对细胞有利的成分，如生长因子，因此也有人提出血清不经灭活直接用于培养，这样做的前提是确认血清中不含补体成分。对于一些品质高的胎牛血清和新牛血清可以考虑不经灭活直接用于细胞培养。

储存条件：血清一般储存于－20℃，同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后，首先要灭活处理，然后分装成小包装，储存于－20℃，使用前融化。融化时现置于4℃。融化后的血清在4℃不宜长时间存放，应尽快使用。

使用浓度：自从有了合成培养基，血清就是作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为5－20％，zui常用是10％。过多血清容易使培养中的细胞发生变化，

特别是一些二倍体的无限细胞系，迅速生长之后容易发生恶性转化。