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技术文章 / article
血清的储存解冻等 传秋生物 血清
2017-01-18 浏览次数：1935
血清
细胞培养液中添加的血清有牛血清，马血清，人血清等，其中牛血清是zui常用的血清，分为胎牛血清和新胜小牛血清。胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清，价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清，如厂家能做到这一点，新生小牛血清的质量与胎牛血清的质量相差不大。如小牛出生后已哺乳，从这种小牛中取出的血清中可能含有较多的生物活性物质，其质量明显不如前两张。
血清的质量，种类及使用的浓度都有可能影响的细胞生长，而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同，尤其是对克隆细胞的生长，某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此，在购买大量血清之前，必须对血清支持细胞生长能力进行检测，然后在大量购买质量好的同一批号的血清，并注意以下几点：
（1）需要长期保存的血清必须储存于-20℃ -70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加10%，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
（2）一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养基一起过滤，切勿直接过滤血清。
（3）瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解一天。然后移入室温，待全部溶解后在分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样温度改变太大，容易造成蛋白凝集而出现沉淀。
（4）热灭活是指56℃，30分钟加热已*解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理的目的是使用血清中的补体成分（comp l ement）灭活。除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多，而且还会影响血清的质量.补体参与反应有：细胞毒作用，平滑肌细胞收缩，肥大细胞和血小板释放组胺，增强吞噬作用，促进淋巴细胞和巨吞噬细胞发生化学趋化和活化。
（5）切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
（6）血清中的沉淀物絮状物：主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清纤维蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm，5分钟去除，也可不用处理。
显微镜下“小黑点”：经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像“小黑点”，常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号血清。
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