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胎牛血清的制备流程非常严格,放心使用

2019-08-30 浏览次数:1974

  胎牛血清的制备流程非常严格,放心使用
 
  1、血清来源:可从世界各国收集胎牛血清,但是必须符合他的质量标准。地方当局还不清楚本地是否有牛海绵状病毒流行的血清不收集,有说明血清质量的证明资料:包括收集过程的全部资料、检验结果和交付情况。
 
  2、血清的收集:胎牛血清是心脏穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10个月内)血清静脉取血。血清采集条件必须符合工业生产的标准:低温下采集、一次分离、分离后立即混合冻存。符合要求的血清56℃水浴30分钟灭活。
 
  3、血清的制备:
 
  a. 超低IgG胎牛血清:通过亲和层析工艺去除胎牛血清中的γ球蛋白,使FBS γ球蛋白含量减到zui低,一般IgG≤5ug/ml,生物学活性不变。
 
  b. 血清透析:用12000~14000分子量的透析膜在0.15M NaCl中透析直到使葡萄糖含量<0.5mg/ml(用葡萄糖氧化酶/过氧化酶方法测定)。
 
  c. γ-射线照射:已经证明γ-射线照射可以有效灭活血清中可能污染的病毒、支原体。照射剂量为30~45KG。而且这个剂量的γ-射线照射不会改变血清的理化性质和对细胞培养的影响。
 
  4、除菌过滤:经过上述处理的粗制血清再经过一系列除菌滤膜过滤包括0.2微米(micron)和0.1微米滤膜。FBS要通过三层0.1微米滤膜,其他血清可通过0.2微米滤膜。
 

胎牛血清

  成品血清质量检定
 
  1)化学检定:渗透压pH
 
  蛋白含量――电泳法
 
  白蛋白 球蛋白 血红蛋白
 
  随着牛年龄增加血清中总蛋白含量相应增加,总的血清蛋白含量可以确定产品规格和年龄。
 
  2) 微生物学检查:细菌、真菌符合USP标准。
 
  支原体:在支原体专业培养基上培养了3~4周,培养温度36℃±2℃
 
  分别在需氧和厌氧条件下进行,有的还需要在支原体琼脂培养皿上传4次,Hoechst荧光素DNA染色检查那些培养法
 
  无法检出的支原体如猪鼻支原体等。
 
  3)内毒素检测
 
  用鲎试剂检查。
 
  4)细菌噬菌体检查
 
  主要检查E.Coli(C300 or K-12)噬菌体。
 
  5)激素含量测定
 
  每批FBS对某些激素含量都要进行测定,包括:雌二醇、胰岛素、孕硐、睾wan素、甲状腺素等。
 
  6)血红蛋白检测
 
  血红蛋白与氧合血红蛋白的比≥70%,血红蛋白含量≤mg15/dl。
 
  7)细胞生长效果测定
 
  细胞克隆效果测定,细胞选择:Sp20/Ag-14 或P3X63-Ag8.653。

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