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原代细胞培养中常见的一些错误

2021-12-13 浏览次数:746

原代细胞(primary culture cell)是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA,RNA和遗传学研究等,还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。


原代细胞如何进行培养?

常用的原代细胞培养有组织块培养和分散细胞培养。

分散细胞培养大致步骤为:将动物组织从机体中取出离散成单个细胞(常用胰蛋白酶),置合适的培养基中培养,使细胞 得以生存、生长和繁殖(注意整个过程无菌)。

组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上,加入培养基后进行培养。


原代细胞培养中的常见错误及正确操作方法?

错误#1:一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间

纠正#1:原代细胞对解冻过程非常敏感,因此将小瓶置于37℃水浴中,保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶,并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪,以便可以立即用于接种细胞,并置于培养箱中。


错误#2:解冻小瓶后直接离心原代细胞

纠正#2:我们不建议在解冻后离心细胞,因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住,在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。


错误#3:允许原代细胞变得过于融合

纠正#3:当生长至100%汇合时,原代细胞可以变得衰老。记住,原代细胞不是100%纯,因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95%融合时,对原代细胞进行传代培养。

错误#4:传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化

纠正#4:当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后*中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。推荐专门为原代细胞配制的胰蛋白酶中和溶液,但也可以使用10%血清或大豆胰蛋白酶抑制剂。


错误#5:原代细胞可以很容易地重新冻存

纠正#5:通常我们不推荐重新冻存原代细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。


错误#6:原代细胞可以无限的增殖

纠正#6:与细胞系不同,原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外,如果你正在使用一个增值困难的细胞类型,你应该密切监测细胞形态,因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移,大量生长从而成为主要细胞。

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