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细胞培养中培养基的作用

2022-01-13 浏览次数：1656

1.液体培养基贮存于4℃ 冰箱，避免光照，实验进行前放在37℃ 水槽中温热。0S'、

2.液体培养基(加血清)存放期为六个月，期间glutamine可能会分解，若细胞生长不佳

可以再添加适量glutamine。

3.粉末培养基配制(以1升为例)：

3.1.细胞培养基通常须添加10%血清，因此粉末培养基之配制体积为900ml，pH为7.2-7.4。NaHCO3为另外添加，若将NaHCO3粉末直接加入液体培养基中会造成pH之误差，或局部过碱。因此粉末培养基及NaHCO3粉末应分别溶解后才混合，然后用CO2气体调整pH，而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH)，因为氯离子对细胞生长可能有影响，且贮存时培养基的pH易发生改变。生物3.2.材料：纯水(milli-Q水或二次至三次蒸馏水，水品质非常重要)，粉末培养基，NaHCO3

电磁搅拌器,无菌血清瓶,0.1或0.2mm无菌过滤膜,pH计，真空泵，CO2气体。

3.3.步骤：

3.3.1.取粉末培养基溶于700mlmilli-Q水中，搅拌使其溶解。

3.3.2.称取适量之NaHCO3粉末溶于200mlmilli-Q水中，搅拌使其溶解，然后通入CO2气体至饱和，约3-5分钟。

3.3.3.将溶解且含饱和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液体培养基中混合。混后溶液之pH应为7.2-7.4，除非pH值偏差太大，否则不需用酸碱再调整之。若为太碱，可再通入CO2气体调整pH。培养基以真空帮浦通过过滤膜时，pH会升高0.1-0.2。

3.3.4.以0.1或0.2mm无菌过滤膜过滤灭菌，同时分装至无菌容器中，标示培养基种类、日期、瓶号等，贮存于4℃。(血清亦可加入培养基中一起过滤)

3.3.5.配制之培养基配制须作生长试验与污染测试。

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