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2022-01-17 浏览次数：819

1.细胞生长至高密度时，即须分至新的培养瓶中，一般稀释比例为1:3至1:6，依细胞种类而异。

2.材料：

2.1.胰酶溶液(0.05%胰酶)：以10ml分装于15ml无菌离心管中，保存于20℃，使用前放在37℃ 水槽回温。2.3.新鲜培养基2.4.无菌吸管/离心管/培养瓶生

3.步骤：

3.1.附着型细胞(adherentcell)

3.1.1.吸掉旧培养液。

3.1.2.用D-PBS洗涤细胞一至二次。

3.1.3.加入胰酶溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉或者倾倒胰酶溶液。(若没有*去除，则在胰酶作用后，加入适量含血清之新鲜培养基终止胰酶作用)

3.1.4.轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量之新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

3.2.悬浮型细胞(suspensioncell)

3.2.1.吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5-10分钟。

3.2.2.吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

3.3.杂交瘤细胞

有些杂交瘤需培养三天以上才会产生抗体，若是更换培养基，则可能会失去抗体。因此继代培养不需离心后更换培养基，直接添加新鲜培养基稀释细胞浓度即可。若体积太大，可倾斜放置，或分至新培养瓶中。