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技术文章 / article
贴壁细胞总有部分圆形或者漂浮的是正常情况吗？
2022-06-16 浏览次数：4859
大部分贴壁细胞培养时都会有一些圆形透亮的细胞存在，也会有一些圆形细胞脱落悬浮的情况存在，这种主要是一些新增殖的细胞或由于局部空间不足被挤出的细胞，只要细胞持续增殖，都会有一些圆形细胞或脱落漂浮细胞，不影响细胞整体增殖和实验，保持正常换液、传代周期即可。细胞具体情况也可以参考细胞库不同细胞照片比对，大部分贴壁细胞都会有圆形细胞、脱落细胞、细胞内颗粒等情况。
如何消除组织培养的污染？
当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查 HEPA 过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素 B 和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1)在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。
2)分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素 B 推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3)每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。
4)确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度 2-3 倍浓度的抗生素的培养液培养细胞 2-3 代。
5)在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6)重复步骤 4。
7)在无抗生素的培养基中培养 4-6 代，确定污染是否以已被消除。
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