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技术文章 / article
什么是牛血清白蛋白？
2023-03-20 浏览次数：427
牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一种球蛋白，包含607个氨基酸残基，分子量为66.446KDa，等电点为4.7。
应用： 牛血清白蛋白（BSA）在生化实验中有广泛的应用，例如在WB实验中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。 防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性减轻不利环境因素，如加热、表面张力及化学因素引起的变性。
测定蛋白浓度 按50：1配置BCA工作液。 10ulC液（蛋白标准）+90ulPBS液稀释成0.5mg/ml的蛋白标准液。 再分别以0、1、2、4、8、12、16、20ul将蛋白标准液加入96孔板的第1~8标准孔中，在其他样品孔中加入10ul待测样品。 分别加PBS定容至20ul。 各孔中加入200ulBCA工作液，室温放置2小时。 用酶标仪测定蛋白浓度：测定A562，依标准曲线算出蛋白浓度。
SDS-PAGE电泳
1、制胶：按比例配制分离胶，缓缓地摇动溶液，使激活剂混合均匀，将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中，再在液面上小心注入一层水，以阻止氧气进入凝胶溶液中，静置40min。 同前按比例配制浓缩胶，但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气。 吸去不连续系统中下层分离胶上的水分，连续平稳的注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡，静制60min以上以保证聚合。
2、预电泳：将聚合好的凝胶安置于电泳槽中，小心拔去梳子，加入电泳缓冲液后低电压10-20V的预电泳20-30min。 （目的是清除凝胶内的杂质， 疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通）。
3、样品准备：首先计算上样体积，然后按样品上样buffer=4：1的比例加入上样bufer混匀，沸水10分钟，冰上5分钟。
4、加样：预电泳后依次加入标准品（Marker）和待分析样品。 （加样时间要尽量短，以免样品扩散，可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。每个泳道加5ul 。）
5、电泳：加样完毕，选择80V恒压进行电泳，电泳直至溴酚蓝染料前沿到达两胶交界处（一般约20分钟），更换至100V恒压电泳，电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳（一般约为1小时20分钟）。
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