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在细胞实验中血清热灭活的作用和意义

2023-03-31 浏览次数:498

一、血清灭活的目的是什么?
1、血清热灭活目的主要是为了去除血清中补体等对热敏感的物质,但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。
2、实验员曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定,他们发现胎牛血清中含有的C1C6仅达成年动物血清的1-3%,而其它补体成分仅有成年动物的5-50%,至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验,也未发现有明显的溶血现象。多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程,也对热敏的补体有灭活的作用。
3、热灭活另一个目的是为了使支原体失活。
 
二、血清使用前是否都必须热灭活?
1、在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。而对于其他大多数的细胞来说是不需要热灭活血清的。
2、很多情况下,热灭活并不会改善细胞的生长,反而会降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下,其促进的比率也是微不足道。另外,血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物污染,从而给用户带来不必要的麻烦。
3、我司建议,对血清进行灭活的用户,需要通过试验来证实其必要性。
 
三、血清热灭活应该怎么操作?
1、融化血清,并充分混匀其内容物。
2、对照瓶装等量水,插入温度计。
3、将血清瓶和对照瓶放入56℃水浴箱。
4、当温度达到56℃,立即开始计时。
5、每5分钟,旋转血清瓶一次,轻微规则摇晃,以使瓶中血清受热均匀一致。656℃,30分钟后,立刻去除血清。
注意事项:血清灭活时,避免接触到加热管,防止受热不均匀,导致灭活失败,血清灭活后,冷水浴冷却。
 
四、为什么血清灭活后产生大量沉淀?
1、血清灭活后出现的沉淀大多数是纤维蛋白析出,属正常现象。灭活过程多次摇晃使血清受热均匀可以降低蛋白的析出。
2、当血清在未化冻状态时直接置56℃水浴、灭活过程中局部受热过高、加热时间过长就会产生胶状沉淀,这样的血清质量严重受损,是无法继续正常使用的。

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