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技术文章 / article
使用胰酶时，有哪些注意事项
2021-12-24 浏览次数：1761
胰酶的作用原理是什么呢？
胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力的作用下成为球形。
使用胰酶时需注意哪些细节问题？
在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CD Marker也可能会下降。胰酶进行分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对于纤维性组织和较硬的癌组织效果较差。胰酶消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。
注意：不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才表示消化好了。
一般肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙状移动就可以了，这时就应该停止消化。
如何选择正确的细胞消化试剂？
EDTA和胰蛋白酶各有什么作用呢？
许多人不用胰蛋白酶，只用EDTA，或者用胰蛋白酶/EDTA联合作用。胰酶切割ECM（负责粘连和附着的蛋白），而EDTA通过螯合Ca2+，抑制Integrin的贴壁活性，所以EDTA的作用更加温和。
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