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细胞培养时如何适应无血清培养基?

2021-12-27 浏览次数:254

许多细胞系容易适应无血清培养基和无蛋白培养基,而对环境要求过高的其它细胞却难以适应变化,这就需要更为专业的方法来适应变化。而根据细胞系的特性,有两种方法可使细胞适应无血清培养基。第一种方法是连续适应/循序隔绝法;另一种方法是直接适应。

一、连续适应/循序隔绝法


第一种方法是连续适应/循序隔绝法。通过一系列的血清还原步骤,使细胞适应无血清培养基。这是优先选用的方法,且不对细胞培养环境形成太过恶劣的变化。

连续适应/循序隔绝法——方法1

使原培养基内的细胞连续地经过以下几个阶段:

阶段1:75%补加血清的培养基或25%无血清培养基

阶段2:50%补加血清的培养基或50%无血清培养基

阶段3:25%补加血清的培养基或75%无血清培养基

阶段4:100%无血清培养基


连续适应/循序隔绝法——方法2

1、以原培养基中的相同浓度,将血清加入无血清培养基内。将细胞从含血清的原培养基转移到加了血清的无血清培养基,此时应注意要提高新培养系统中的细胞密度。让细胞有一个适应过渡期。

2、按照方法1,缓慢地降低血清浓度,使细胞在每个阶段有适应的时间。

3、一旦血清补加量降为0,在用于进行分析或其他操作前,让细胞培养物具有数个适应过渡期。

二、直接适应法

另一种方法是直接适应。其中,细胞直接从含血清培养基转移到无血清培养基内。将大量细胞直接转移到无血清或无蛋白的新培养基内。细胞必须处于指数生长期中期,且存活率>90%。

每3到4天更换约50%的培养基,以防止培养基变成酸性。维持高于正常值的细胞培养密度,直至培养的细胞需要每日更换培养基。这时,将细胞扩增到多个培养瓶内。

考虑建议

请在适应过程中,细胞通常对PH和温度变化较为敏感。让细胞在每个阶段都至少有一个适应过渡期。

细胞存活率和细胞密度

细胞在对数生长期中期快速分裂,且在适应过程开始时,存活率大于90%。这一点至关重要。当细胞需传代时,建议采用1:2或1:3的小传代比例,以维持更高的细胞密度,同时提供隔绝期间可能有助于细胞的细胞生长因子。当细胞适应新的培养条件时,在增大细胞传代密度。

细胞生长

如果在适应过程中,细胞停止了生长,则需让细胞有更多的时间来适应培养基组合。例如,在方法1的阶段4,向无血清培养基添加少量的血清(1-3%)。这样有助于细胞更容易地适应新的培养基。然后,在几个过渡期内,缓慢地减少血清量,直至学清量为0。

悬浮培养物

Meiatech公司的无血清培养基和无蛋白培养基不含血清中所发现的细胞附着延伸影子。在一段过渡期内,贴壁细胞将开始离开表面,并成为悬浮细胞系开始生长。细胞也可能因适应而发生形态变化。监测细胞的生长速度,只要细胞能够与新系统相融合,任何形态变化都不重要。

细胞丛

在适应于无血清培养期间,细胞容易形成丛。传代培养时,将丛轻轻折断,使其分散开。将培养物从静止细胞培养瓶内转移到可旋转锥形瓶内,这样可能会有助于防止细胞丛的形成。

抗生素

由于血清蛋白易于粘合到抗生素上,因此,不建议在无血清适应过程中使用抗生素。如不存在血清蛋白,则抗生素水平可能会对细胞产生毒性。

预防措施

确保在开始适应过程前,储存有大量原培养基的细胞。如果细胞没有存活到下一阶段,则在整个过程中保存每一阶段使用的培养瓶。



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