小鼠原代膈肌细胞，499/株；提取周期1周左右，提供支原体检测报告和免疫荧光鉴定，良好的售后支持，技术一对一辅导，确保养好。蒂科生物提供HAKATA 胎牛血清、拥有自己的细胞库，库存几千株细胞株细胞系、耐药株、永生化细胞、原代细胞等，另出售相关上下游试剂，欢迎咨询！

小鼠原代膈肌细胞（主要是膈肌成肌细胞）属于难养、高要求的原代细胞，比四肢骨骼肌原代更娇气，核心痛点是杂细胞多、存活率低、易分化、传代极短。

一、基本特性

• 类型：骨骼肌成肌细胞（肌卫星细胞），贴壁、梭形，可融合成肌管。

• 来源：膈肌（含肌纤维+中央腱），新生鼠（P0–P3），成年鼠活性差。

• 倍增：约24–36h，但50%汇合即分化，增殖窗口窄。

• 传代：最多2–3代，第3代后快速衰老/分化，无永生化。

• 纯度：直接分离含大量成纤维细胞、内皮细胞、血细胞，需纯化。

二、培养难度（★★★★☆）

✅ 可控优点

• 新生鼠取材稳定，差速贴壁法可提纯度。

• 专用培养基可抑制分化、延长增殖期。

⚠️ 核心难点（易踩坑）

1. 消化难：膈肌含大量结缔组织，需胶原酶IV+胰酶联合消化，时间过长死细胞多、过短产量低。

2. 杂细胞污染：成纤维细胞生长快，3天内必压制肌细胞，需严格差速贴壁（30–60min弃贴壁）。

3. 贴壁依赖强：必须明胶/胶原包被板，裸板几乎不贴。

4. 血清/营养要求高：需20% FBS+10%马血清+1%鸡胚提取物，普通10% FBS直接长死。

5. 分化临界点低：50%汇合即开始融合成肌管，失去增殖能力，必须早传代。

三、标准培养方案（直接用）

• 取材：P0–P3新生小鼠，无菌取膈肌，预冷PBS洗血，剪至1mm³。

• 消化：0.1%胶原酶IV+0.25%胰酶，37℃，20–30min，每5min吹打，终止用含血清培养基。

• 纯化：差速贴壁（37℃，30–60min），弃贴壁成纤维细胞，上清为肌细胞。

• 包被：2%明胶37℃包被1h，PBS洗1次。

• 培养基：DMEM/F12 + 20% FBS（优级，如SH30406） + 10%马血清 + 1%鸡胚提取物 + 1%双抗。

• 接种密度：1–2×10⁵ cells/35mm皿，37℃、5%CO₂。

• 换液：每2天1次，弃漂浮死细胞。

• 传代：40%–50%汇合即传（约3–4天），比例1:2，最多2–3代。

四、避坑4条

1. 必须用新生鼠，成年鼠膈肌细胞活性差、易死亡。

2. 消化别超30min，否则肌细胞损伤、贴壁差。

3. 严格差速贴壁，否则成纤维细胞会“吃"掉肌细胞。

4. 别让细胞长太满，50%汇合必传代，分化后不可逆。

五、对比参考

• 比HeLa/CL-11：难很多（原代vs肿瘤、需纯化、传代短）。

• 比四肢骨骼肌原代：略难（结缔组织多、消化更难）。

• 比原代内皮细胞：难度相当，但纯化更繁琐。

一句话：新生鼠+联合消化+差速贴壁+高营养+早传代，才能养好小鼠原代膈肌细胞；缺一步就容易全军覆没。

贴壁细胞接收后的处理：

1. 收到细胞后 ，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-4h ，若发现培养瓶破损 、有液溢出及细胞有污染 ，请拍照后及时联系我们

2. 静置完成后 ，请在显微镜下确认细胞状态 ， 同时给刚收到的细胞拍照(10x ， 20x)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存 ，作为售后时收到时细胞状态的依据 。

3. 贴壁细胞:细胞在379C培养箱中放置2-3h ，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况 ，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况 。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下 ，可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收 ，重悬打入到原培养瓶中)加入新配制的wan quan培养基6-8mL ，放到细胞培养箱中继续培养 。若细胞生长密度达70%-80%以上 ，可以对细胞进行传代处理 。传代过程中 ，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收 。

备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞 ，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的wan quan培养基来培养细胞 。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。

细胞复苏

贴壁细胞的复苏 、传代 、冻存步骤

1. 贴壁细胞复苏:从液氮灌中或-80℃C冰箱中查找到需要复苏的细胞 ，水浴锅提前打开预热 37℃℃1)将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻;

2.加入到含4-6mLwan quan培养基的离心管中混合均匀 。

3.弃去上清液 ，wan quan培养基重悬细胞 。然后将细胞悬液加入含6-8m!培养基接种于T25 培养瓶中(或6cm 皿中) ，培养guo ye ，第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度 。

4. 贴壁细胞传代:如果细胞密度达80%-90% ，即可进行传代培养

5.弃去培养上清 ，用不含钙 、镁离子的PBS 润洗细胞 1-2 次;

6.加 1-2mL 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中 ，置于 37°℃培养箱中消化2-3min ，然后在显微镜 下观察细胞消化情况 ，若细胞大部分变圆并脱落 ，迅速拿回操作台 ，轻敲几下培养瓶后 ，加5ml以上含10%血清的

培养基终止消化;3)轻轻吹打细胞 ，脱落后吸出至离心管中 ， 1000rpm离心3-5min ，弃去上清液 ，补加1-2mL培养基后吹匀;4)按 5-6mL/瓶补加wan quan培养基 ，将细胞悬液按 1:2到 1:3的比例分到新的含 6-8mL培养基的培

养皿中或者培养瓶中 。

7. (传代两个T25或者两个6cm的皿)

贴壁细胞冻存:

1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中 ，可使用血球计数板计数 ，来决定细胞的 冻存密度 。一般细胞的推荐冻存密度为1x10 6~1x107个活细胞/ml;

2.1000rpm离心3-5min ，去掉上清 。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1m(冻存液含1x10^6~1x107个活细 胞/ml分配到-个冻存管中将细胞分配到冻存管中 ，标注好名称 、代数 、 日期等信息;

1. 按冻存数量加入无血清冻存波后直接放-80℃冰箱过夜 ，后续可转入液氨罐中长期保存 。

细胞接收注意事项：

1：观察有无破损漏液情况 ，如有请拍照及时联系客服。

2 ：酒精消毒培养瓶表面后显微镜下观察细胞状态 ，观察拍照后不用打开培养瓶盖 ，放入培养箱静止2- 3小时稳定细胞状态。

3 ：请按照细胞操作指南进行第一次传代冻存处理。

4 ：产品随货会附带细胞说明书、细胞培养操作指南、STR 鉴定、支原体检测报告。

5 ：若产品有异常或其他疑问 ，可随时联系客服

6.收到后 ，培养条件(完培配置)需跟保持一致 ，如有变动销售另行告知

仅限于科学研究 ，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

小鼠原代膈肌细胞，499/株

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